組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實驗室的普通常規(guī)設(shè)備外，尚有一些特殊需要的設(shè)備?；究煞譃閮纱箢悾?*類為常用的基本設(shè)備；第二類為較**的特殊設(shè)備。

1. 常用的基本設(shè)備

（1） 儀器：

a）顯微鏡：倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一，便于掌握細(xì)胞的生長情況并觀察有無污染等。

——若有條件，尚可配置帶有照相系統(tǒng)的高質(zhì)量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時電影拍攝裝置等，以便隨時觀察、記錄、攝影細(xì)胞生長情況。

b） 培養(yǎng)箱：體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，大多數(shù)情況下，**適溫度是37℃，溫差變化一般不應(yīng)超過±0.5℃，細(xì)胞在溫度升高2℃時，持續(xù)數(shù)小時即不能耐受，40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱，如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。

恒溫培養(yǎng)箱——應(yīng)選隔水式或晶體管自控溫培養(yǎng)箱，此類培養(yǎng)箱靈敏度高，溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價格較便宜，其缺點是只宜于作密閉式培養(yǎng)。

CO2培養(yǎng)箱——目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時所需要的一定量的CO2（常用濃度為5％），易于使培養(yǎng)液的pH保持穩(wěn)定，適用于開放或半開放培養(yǎng)。培養(yǎng)細(xì)胞的器皿可用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶；當(dāng)使用培養(yǎng)瓶時，可將瓶蓋略微旋松，使培養(yǎng)瓶內(nèi)與外界保持通氣狀態(tài)。由于這種培養(yǎng)方法培養(yǎng)器皿內(nèi)部與外界相通，培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔，應(yīng)定期以紫外線照射或酒精消毒。同時培養(yǎng)箱應(yīng)放置盛有無菌蒸餾水的水槽，防止培養(yǎng)液蒸發(fā)，使箱內(nèi)相對濕度始終保持為100％。

c）干燥箱：用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時，電熱干燥箱升溫較高，一般需達(dá)到160℃以上。通常使用鼓風(fēng)式電熱干燥箱。其優(yōu)點是溫度均勻、效果較好，缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫后鼓風(fēng)而應(yīng)鼓風(fēng)與升溫同時開始，**100℃時，停止鼓風(fēng)，應(yīng)避免包裹器皿的紙或棉花燒焦，燒焦的碎屑可影響細(xì)胞的生長。消毒后，不能立即打開箱門以免驟冷而導(dǎo)致玻璃器皿損壞，應(yīng)等候溫度自然下降**100℃以下方可開門。

d）水純化裝置：細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高，細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。水純化時可采用離子交換裝置或蒸餾器。離子交換純水尚不能有效去除有機物，因此用水時尚需再次蒸餾。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水：即使是用于玻璃器皿的沖洗，也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。

目前G內(nèi)使用較多的是自動雙重純水蒸餾器（石英管加熱），使用方便，安全、蒸餾速度快（1600ml/h）。

使用注意：

○a不可采用普通自來水蒸餾，以免蒸餾器內(nèi)很快結(jié)成水垢影響蒸餾效果；同時，還需視蒸餾器內(nèi)存水垢程度定期徹底清洗蒸餾器。

○b正確的使用方法是將經(jīng)金屬蒸餾器蒸餾的蒸餾水加入玻璃蒸餾器內(nèi)進(jìn)行再次蒸餾。

一般配制培養(yǎng)液的用水應(yīng)在配液前蒸餾，不宜使用存放數(shù)日的三蒸水，以免影響培養(yǎng)用水的質(zhì)量。

目前市場上供應(yīng)的是含有各種級別和類型的采用一種或多種純化方法相結(jié)合的使普通水純化為純水和超純水的純水系統(tǒng)可供選擇。例如：設(shè)計靈活的可以掛壁、也可為臺式，也可以有儲水箱、也可直接用分液槍的純水裝置；還可根據(jù)各類實驗用水需求選擇配備有效殺菌或去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，甚**可有效去除掉熱源、內(nèi)毒素的超濾型純水器。

e）冰箱：細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備

○a普通冰箱或冷藏柜

——儲存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。

○b低溫冰箱（-20℃）、超低溫冰箱

——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑，如酶、血清等。

——細(xì)胞培養(yǎng)室的冰箱應(yīng)屬專用，不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對細(xì)胞有害的物質(zhì)，且應(yīng)保持清潔。

f）細(xì)胞冷凍儲存器：儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小，取放使用方便及液氮揮發(fā)量（經(jīng)濟）三種因素。液氮容器的大小可自25L～500L，可以儲存1ml的安瓿250～15000個左右。液氮溫度可低達(dá)-196℃，使用時應(yīng)防止凍傷。由于液氮不斷揮發(fā)，應(yīng)注意觀察存留液氮情況，及時定期補充液氮，避免揮發(fā)過多而致細(xì)胞受損。

目前，G內(nèi)各類實驗室已廣泛使用新型的細(xì)胞冷凍儲存器。市場所提供的各種新型的細(xì)胞冷凍儲存器具有性能優(yōu)異，使用方便等特點。例如：

——可通過先進(jìn)的電子控制器實現(xiàn)凍存自動化并監(jiān)測液氮水平和樣品溫度，確保樣品溫度始終處于設(shè)定溫度點；

——可配備先進(jìn)的報警系統(tǒng)，分別警報液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況：

——同時具備熱氣體旁路系統(tǒng)，防止高于-130℃的暖空氣進(jìn)入液氮罐，從而更有效地保護(hù)樣品，防止升溫。

另外，多種規(guī)格的先進(jìn)液氮運輸，供應(yīng)罐系列不僅移動方便，還可通過連接管給儲存罐補充液氮，提高工作效率，保證樣品安全。

g）離心機：進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時，常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作，通常需要使用離心機。

○a一般可常規(guī)配置4000rpm的G產(chǎn)臺式離心機，例如細(xì)胞沉降，使用80～100g的離心機即可，離心力過大有時可能引起細(xì)胞的損傷。

○b另外，可根據(jù)需要添置其他類型如大容量或可調(diào)節(jié)溫度的離心機等

○c若需特殊用途，例如某些細(xì)胞的分離制備需梯度離心，則需另行配置實驗所需的具備其他特殊功能的離心機。

h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。

分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。根據(jù)稱取物質(zhì)的量和稱量精度的要求，選擇適宜級別的天平。要求精密稱定時，當(dāng)取樣量大于100 mg 選用感量為0.1mg天平，在100－10 mg 選用感量為0.01mg 天平，小于10mg選用感量為0.001 mg天平 。

i）消毒器：直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。

常用：○a手提式高壓蒸汽消毒器

○b目前市場上，具有高效、安全、方便等性能，適用于各種器皿、液體、培養(yǎng)基的高壓滅菌裝置已在流通（如脈動真空滅菌器）。可供使用者在滅菌的同時監(jiān)測滅菌容器內(nèi)的壓力和溫度，確保滅菌質(zhì)量和安全，并可通過記憶（儲存）支持系統(tǒng)改變各種參數(shù)（例如滅菌、排氣、加熱等參數(shù)），即使在進(jìn)行滅菌時發(fā)生停電故障，仍可保留所設(shè)定的參數(shù)

j）濾器：目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液，包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌。

目前常使用的濾器有Zeiss濾器、玻璃濾器和微孔濾器，各種濾器有其使用原理和特點（后詳述）。

（2）培養(yǎng)用器皿：

a）培養(yǎng)器皿：供細(xì)胞接種、生長等用的器皿，可由透明度好、無毒的中性硬質(zhì)玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成。

（a）玻璃培養(yǎng)器皿的優(yōu)點是多數(shù)細(xì)胞均可生長，易于清洗、消毒，可反復(fù)使用，并且透明而便于觀察；缺點是易碎，清洗時費人力。

（b）塑料制培養(yǎng)器皿的優(yōu)點是一次性使用，廠家已消毒滅菌密封包裝，打開即可用于細(xì)胞培養(yǎng)操作。

常用的培養(yǎng)器皿：

培養(yǎng)瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞，膠塞多用于密封培養(yǎng)。G產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量（ml）表示，如250ml、100ml、25ml等；進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積（cm2）表示。

培養(yǎng)皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺搿⒓?xì)胞繁殖等實驗使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。

多孔培養(yǎng)板：為塑料制品?？晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測實驗使用。其優(yōu)點是節(jié)約樣本及試劑，可同時測試大量樣本，易于進(jìn)行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格，常用的規(guī)格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

各種單層生長的細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中長滿時可獲得的細(xì)胞數(shù)，主要是取決于器皿的底表面積和細(xì)胞體積的大小。常用培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)（以Hela細(xì)胞為例）見表2。

表2 常用的培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)

培養(yǎng)器皿 底面（cm2） 加培養(yǎng)液量（ml） 可獲細(xì)胞量

96孔培養(yǎng)板 0.32 0.1 1×105

24孔培養(yǎng)板 2 1.0 5×105

12孔培養(yǎng)板 4.5 2.0 1×106

6孔培養(yǎng)板 9.6 2.5 2.5×106

4孔培養(yǎng)板 28 5.0 7×106

3.5cm培養(yǎng)皿 8 3.0 2.0×106

6 cm培養(yǎng)皿 21 5.0 5.2×106

9 cm培養(yǎng)皿 49 10.0 12.2×106

10 cm培養(yǎng)皿 55 10.0 13.7×106

25cm塑料培養(yǎng)瓶 25 5.0 5×106

75 cm塑料培養(yǎng)瓶 75 15~30 2×107

25 ml玻璃培養(yǎng)瓶 19 4.0 3×106

100 ml玻璃培養(yǎng)瓶 37.5 10.0 6×106

250 ml玻璃培養(yǎng)瓶 78 15.0 7×107

2500 ml旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶 700 100~250 2.0×108

b）培養(yǎng)操作有關(guān)的器皿：

○a貯液瓶：主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格，如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

○b吸管：主要分為刻度吸管、無刻度吸管?？潭任苤饕糜谖?、轉(zhuǎn)移液體，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管，除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外，彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。

○c加樣器（移液器）：用于吸取、移動液體或滴加樣本?？筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小，吸量準(zhǔn)確、方便。尤以微量加樣器，可保證實驗樣品（或試劑）含量精確，重復(fù)性良好。目前，可高溫消毒的，多通道的各類移液器可供使用者選擇，能確保加樣準(zhǔn)確、快速、方便并且達(dá)到無菌要求。

c）其他用品：尚有收集細(xì)胞用的離心管，放置試劑或臨時插置吸管用的試管，裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器，用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽，套于吸管頂部的橡膠吸頭，封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗，超凈工作臺使用的酒精燈，供實驗人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。

（3）器械：主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時持取物件。常用的有：手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），用于解剖動物、分離及切剪組織，制備原代培養(yǎng)的材料；眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），用于將組織材料剪成小塊；血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直），用于持取無菌物品（如小蓋玻片）夾持組織等；口腔科探針或代用品，用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。

2、特殊設(shè)備

細(xì)胞培養(yǎng)實驗室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外，如有條件，可添置一些特殊或先進(jìn)的設(shè)備儀器，以便更有效、更精確、更深入地進(jìn)行實驗室工作。例如：

（1）酶聯(lián)免疫檢測儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測定及細(xì)胞毒性、藥物敏感性檢測等。

（2） 超低溫冰箱（-85℃）——便于儲存某些試劑及標(biāo)本。

（3）旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。

（4） 熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察。

（5） 流式細(xì)胞儀——可更精確及快速檢測細(xì)胞。

（6）用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器，例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測定儀等。